艾柏森生物提供重組人源化抗體穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)。流程如下——

1. 載體構(gòu)建&病毒包裝

將人源化的抗體基因轉(zhuǎn)接到慢病毒載體上，然后對(duì)質(zhì)粒表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)包裝獲得過(guò)表達(dá)目的基因的慢病毒質(zhì)粒。慢病毒載體系統(tǒng)的包裝成分與載體成分一起轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行包裝；24至48小時(shí)后，收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，濃縮后進(jìn)行滴度測(cè)試。

2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

常用的真核表達(dá)載體的抗性標(biāo)志物有嘌呤霉素(Puromycin)、潮霉素(Hygromycin)和新霉素(Neomycin)。首先確定Puromycin/G418的篩選濃度和病毒轉(zhuǎn)染濃度，然后病毒懸液轉(zhuǎn)染細(xì)胞24h,Puromycin/G418篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株，ELISA和WB法鑒定。

3. 單克隆化

使用Molecular ClonePix2系統(tǒng),高通量、自動(dòng)化的篩選出100-200個(gè)高水平分泌克隆，并從中挑選最佳10個(gè)高產(chǎn)克隆，進(jìn)行下一步的穩(wěn)定性測(cè)試。

4. 細(xì)胞系穩(wěn)定篩選

細(xì)胞株多次傳代數(shù)次后，就有可能會(huì)出現(xiàn)遺傳不穩(wěn)定性。我們挑選出最優(yōu)的10個(gè)克隆，進(jìn)行10次傳代后，qPCR和WB法檢測(cè)細(xì)胞株的穩(wěn)定性。最后我們提供序列及載體報(bào)告, 3株表達(dá)最好的細(xì)胞株，表達(dá)分析、穩(wěn)定性測(cè)試報(bào)告以及詳細(xì)的穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建報(bào)告。

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