蛋白的酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)是以酵母的遺傳分析為基礎(chǔ)，研究蛋白間相互作用的一種有效技術(shù)手段。轉(zhuǎn)錄活化蛋白可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由其上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域，即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域(Activation Domain,AD)共同完成的。

　　以Gal4系統(tǒng)為例，BD和AD分別由Gal4蛋白上不同的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域(1-147aa與768-881aa)構(gòu)成。在利用GAL4系統(tǒng)篩選cDNA文庫(kù)或研究蛋白間的相互作用時(shí)，DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域與靶蛋白即"誘餌"相結(jié)合，轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域與文庫(kù)蛋白或要驗(yàn)證的蛋白相結(jié)合。一般情況下，單獨(dú)的BD可以與GAL4上游活化序列（GALUAS）結(jié)合但不能引起轉(zhuǎn)錄，單獨(dú)的AD則不能與GAL UAS結(jié)合；只有當(dāng)BD與AD分別表達(dá)的融合蛋白由于相互作用而導(dǎo)致兩者在空間上相互靠近時(shí)，BD與AD才能與GAL UAS結(jié)合并且引起報(bào)道基因的轉(zhuǎn)錄，從而激活下游報(bào)告基因，通過(guò)這一系列實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證兩個(gè)蛋白之間的相互作用。

艾柏森生物提供如下服務(wù)內(nèi)容：

★ 酵母雙雜交文庫(kù)的構(gòu)建：

1. 總RNA提取及mRNA純化；

2. SMART技術(shù)合成cDNA一鏈，LD-PCR合成雙鏈cDNA；          

3. 雙鏈cDNA的純化；      

4. 轉(zhuǎn)化AH109酵母感受態(tài)細(xì)胞；          

5. 收集轉(zhuǎn)化子及檢測(cè)文庫(kù)質(zhì)量。

★ 酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建：

克隆cDNA全長(zhǎng)序列，構(gòu)建包含目的基因的PGBKT7誘餌載體，轉(zhuǎn)化Y187酵母菌株。

★ 酵母雙雜交篩選及鑒定

★ 您需要提供以下材料：

1. 新鮮組織材料、凍存材料或高質(zhì)量RNA、誘餌基因的模板。

2. 盡可能全面的實(shí)驗(yàn)相關(guān)信息。

★ 您將獲得以下結(jié)果：

構(gòu)建好的雙雜交文庫(kù)甘油菌：
1. 文庫(kù)容量≥106；
2. 文庫(kù)滴度≥107cfu/ml；
3. 插入片段平均大于1kb（不同物種略有差別）；
4. 減低高豐度表達(dá)基因10-100倍。

酵母雙雜交篩選得到的陽(yáng)性克隆

實(shí)驗(yàn)過(guò)程報(bào)告及相關(guān)數(shù)據(jù)圖片

★ 服務(wù)周期：

文庫(kù)構(gòu)建1個(gè)月

文庫(kù)篩選1-2個(gè)月

相關(guān)服務(wù):

★　酵母雙雜交篩選服務(wù)

★　哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙雜交服務(wù)

★　胞內(nèi)抗體制備服務(wù)

技術(shù)平臺(tái):

★　基因工程服務(wù)平臺(tái)