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定制半胱氨酸改型抗體
定制半胱氨酸改型抗體 副標(biāo)題 技術(shù)背景： 二硫鍵（S-S 鍵）是通過蛋白質(zhì)中兩個半胱氨酸上的巰基 (-SH) 氧化而形成的，是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾形式。蛋白質(zhì)通過各種鏈間和鏈內(nèi)的半胱氨酸連接在一起，這對蛋白質(zhì)分子保持正確的高級結(jié)構(gòu)，維持蛋白質(zhì)的生物活性至關(guān)重要。抗體藥物中二硫鍵的排布是對藥物結(jié)構(gòu)特性的一種反映，因此二硫鍵連接形式的確認(rèn)成為抗體藥物結(jié)構(gòu)確認(rèn)過程中具有非常重要的作用。 發(fā)展歷程及原理： 2016年，麻省理工學(xué)院的Bradley L.Pentelute及其同事，成功的開發(fā)出了一種通過將π鉗序列 (Phe-Cys-Pro-Phe) 引入肽和蛋白質(zhì)中，從而達(dá)到可以只選擇性的修飾其序列中符合條件的半胱氨酸殘基的方法。 選擇性修飾半胱氨酸（Cys）殘基的過程中，是可以使用馬來酰亞胺的ligation或烷基化的，但這些方法的局限性在于它們都不能實現(xiàn)位置選擇性修飾。鑒于蛋白質(zhì)是通過自身的三維結(jié)構(gòu)來調(diào)節(jié)其交互和特定反應(yīng)的特征，由此得到了一個使用特定的序列來加速這個反應(yīng)的想法，于是研發(fā)出了一種新的方法。 全氟芳基與半胱氨酸（Cys）之間的芳香族親核取代反應(yīng)可以在有機(jī)溶劑中進(jìn)行，但其在水中的反應(yīng)速率卻非常緩慢。因此，在序列為Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Gly-Leu-Leu-Lys（Xaa為任意的氨基酸）的肽庫中，加入生物素-全氟芳基探針（即加入TEV蛋白酶中以切段可以分割的序列），再應(yīng)用使用了鏈霉親和素的下拉法后，可以鑒定出含有Phe-Cys-Pro-Trp序列的肽會優(yōu)先反應(yīng)。 使用由9個殘基組成的肽作底物進(jìn)行的反應(yīng)來作進(jìn)一步的檢驗顯示：當(dāng)Xaa都是Phe時可以獲得一個比較理想的產(chǎn)率，而當(dāng)Xaa中的任一個從Phe變?yōu)镚ly或者當(dāng)Pro變成D-Pro時，產(chǎn)率便會有一個顯著的下降。 至此，成功地找到了一個叫做π-鉗（Phe-Cys-Pro-Phe）的特殊序列。接著，研究團(tuán)隊經(jīng)過一系列實驗終于證明：在含有多個半胱氨酸（Cys）殘基的肽或蛋白質(zhì)中，只有那些包含了“π-鉗”序列的半胱氨酸（Cys）殘基才能被選擇性的全氟化。當(dāng)”π-鉗”序列的位置在肽的氨基酸序列的C端，N端和中間的任合位置都可以取得非常理想的產(chǎn)率。另外，通過引入一個”π-鉗”來避開蛋白質(zhì)的活性中心能夠?qū)θ我馕恢眠M(jìn)行修飾反應(yīng)，所以其應(yīng)用范圍也很廣。
技術(shù)簡介： 本發(fā)明涉及半胱氨酸改造的抗體和偶聯(lián)物。通過用具有非交聯(lián)的高度反應(yīng)性半胱氨酸氨基酸取代親代抗體的一種或多種氨基酸改造抗體。還可以用一個或多個半胱氨酸氨基酸改造抗體片段而形成半胱氨酸改造的抗體片段。本公司提供設(shè)計、制備、篩選和選擇半胱氨酸改造的抗體的方法。
選擇我們： 基于艾柏森蛋白質(zhì)表達(dá)平臺、噬菌體展示技術(shù)、基因工程平臺，以及優(yōu)秀的科研團(tuán)隊，優(yōu)質(zhì)的生物信息學(xué)分析手段，可以根據(jù)您的需求，為您提供半胱氨酸改造抗體的設(shè)計制備，優(yōu)化，純化等服務(wù)，讓您的實驗更加便捷。
參考文獻(xiàn)： [1]π-Clamp-mediated cysteine conjugation.Zhang, C.;Welborn, M.; Zhu, T.;Yang, N. J.; Santos, M. S.; Voorhis, T. V.; Pentelute, B. L.*.Nat. Chem. 2016,8, 120–128. doi:10.1038/nchem.2413 |
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